Contamination par l'ADN de flacons de vaccins monovalents à ARNm de Pfizer (Substack)

Contamination par l'ADN de 8 flacons de vaccins monovalents à ARNm de Pfizer
Article originel : DNA contamination in 8 vials of Pfizer monovalent mRNA vaccines
Substack, 30.03.23

Introduction

La contamination par l'ADN a été récemment documentée dans des vaccins ARNm mono et bivalents. Cette étude a été limitée par le nombre de flacons examinés. Nous avons examiné 8 flacons du même lot de vaccins monovalents à ARNm de Pfizer (lot n° FL8095) en utilisant la qPCR et la RT-qPCR. Ces flacons n'ont pas été ouverts mais sont datés du 21/09 sur l'étiquette et du 22/03 (écriture manuscrite). 2 ul de chaque flacon ont été analysés.

Figure 2. qPCR et RT-qPCR de 8 flacons en trois exemplaires. Le rouge représente le vecteur. Le bleu est la protéine spike

Figure 3. qPCR et RT-qPCR divisées en qPCR (gauche) et RT-qPCR (droite). Le rouge représente le vecteur et le bleu la protéine spike

Tableau 1. Valeurs CT pour Spike et Vector pendant la qPCR (ADN uniquement). L'écart-type pour les mesures en trois exemplaires est présenté horizontalement en caractères noirs. L'écart-type pour les mesures en trois exemplaires est indiqué horizontalement en caractères noirs. L'écart-type pour les mesures de flacon à flacon est indiqué verticalement en rouge. Delta CT ou (Vector CT moins Spike CT) représente le rapport entre l'ADN du Spike et celui du Vecteur. Devrait = 1.

Tableau 2. Valeurs CT pour Spike et Vector pendant la RT-qPCR (ARN+ADN). Le rapport ARN/ADN est compris entre 43:1-161:1. La fourchette autorisée par l'EMA est de 30 à 30:1. 18-70 fois la limite de l'EMA.

Méthodes

2ul de chaque flacon ont été ajoutés à 100ul de la solution de lyse des feuilles et bouillis comme décrit précédemment. 1ul de chaque échantillon bouilli a été utilisé pour la qPCR et la RT-qPCR comme décrit précédemment.

2ul de vaccin ont été ajoutés à 100ul de solution de lyse de poinçon de feuille.

• Préparation rapide de l'ébullition pour la surveillance des vaccins.
• Méthodes qPCR décrites précédemment.
   

Conclusions

Les 8/8 vaccins monovalents provenant d'un seul cas d'un seul lot de vaccins monovalents Pfizer ne répondent pas à la spécification de l'EMA de 3030:1 ARN:ADN (330ng/mg ADN/ARN). Ils dépassent la limite d'un ordre de grandeur (18-70 fois). La contamination par l'ADN est très constante et le rapport ARN/ADN d'un flacon à l'autre est très constant au sein d'un même lot de vaccins monovalents. Un séquençage supplémentaire est en cours pour évaluer l'indel hétéroplasmique de 72 pb dans le promoteur SV40 du vecteur. Cet indel a été détecté dans les vaccins bivalents de Pfizer.
 

Références

Présentation de la FDA sur la contamination par l'ADNdb

Problèmes liés à l'ADN résiduel du substrat cellulaire dans les vaccins viraux (en anglais)

Citation aimablement fournie par David Weisman

 Documentation de l'EMA - Page 74

Remerciements. Nous tenons à remercier David Wiseman, Michael Palmer, Sasha Latypova
Lynn Fynn, le public de PANDA et Keith Robison pour les améliorations et les critiques qu'ils ont suggérées.

Traduction SLT